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　　24考研农学考研复习：缓冲液中的这些成分分别起何种作用

　　T4DNA连接酶是分子生物学实验中常用的连接酶，该酶催化双链DNA或RNA上相邻的5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。T4DNA连接酶反应缓冲液及反应条件如下：[50mMTris-HCl(pH7.5)，10mMMgCl2，10mMDTT，1mMATP]，16℃温育。

　　请结合酶学章节内容说明缓冲液中的这些成分分别起何种作用?

　　T4-DNA连接酶一种封闭DNA链上切口酶，借助ATP或NADP水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化形成磷酸二酯键。T4DNA连接酶可催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需ATP作辅酶，不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接，也可以催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。可应用于在粘性末端或平末端连接双链DNA分子，也可应用于修补双链DNA、RNA或DNARNA杂交体上的缺口。

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