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　　24考研农学考研备考：基因工程的步骤

　　重组DNA技术有时也被称为基因工程，其基本原理是：将目标DNA(一个基因或一个基因的片段)与特定的载体DNA连接，形成重组DNA分子，然后将重组DNA转入受体细胞中。随着受体细胞的生长，转入的重组DNA同时可以扩增，并在受体细胞内得到表达，产生所需要的蛋白质或产生影响受体细胞的新的遗传性状。

　　完整DNA克隆过程包括五大步骤：目的DNA的分离获取(分);载体的选择与准备(选)，目的DNA与载体的连接(连);重组DNA转入受体细胞(转);重组体的筛选与鉴定(筛)。

　　①目的DNA的分离获取(分)：分离获取目的DNA的方法有：

　　化学合成法，根据某基因的核苷酸序列，通过DNA合成仪合成目的基因

　　DNA文库筛选，从基因组DNA文库中，利用限制性内切核酸酶切割染色体获取基因

　　cDNA文库法，以mRNA为模板合成互补的DNA

　　PCR法，通过聚合酶链反应(PCR)仪，设计引物，扩增获取目的DNA

　　②载体的选择与准备应根据目的DNA片段决定(选)：进行DNA克隆的目的主要有二：一是获取目的DNA片段，通常选用克隆载体;二是获取目的DNA片段所编码的蛋白质，需选用表达载体。

　　③目的DNA与载体连接形成重组DNA(连)：依据目的DNA和线性化载体末端的特点，可采用不同的连接策略。

　　④重组DNA转入受体细胞使其得以扩增(转)：将重组DNA导入宿主细胞的常用方法有：转化、转染、感染

　　⑤重组体的筛选与鉴定(筛)：重组DNA分子导入宿主细胞后，可通过载体携带的选择标记或目的DNA片段的序列特征进行筛选和鉴定，从而获得含重组DNA分子的宿主细胞。

　　⑥克隆基因的表达(表达)：基因工程中的表达系统包括原核和真核表达体系。

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